Effetto delle poliammine sulla regolazione della proteina cinasi C.

Effetto delle poliamine sulla regolazione della proteina cinasi C. Nel tentativo di contribuire al chiarimento del ruolo delle poliamine sui processi di fosforilazione intracellulari, in questa fase dell’attività di ricerca abbiamo preso in esame gli effetti delle poliamine su diversi aspetti della regolazione della proteina cinasi C (PKC), serina/treonina cinasi che si presenta in diverse forme isoenzimatiche, alcune Ca++/diacilglicerolo (DAG)/fosfolipide dipendenti, ed altre con attività indipendente dal Ca++. Dal momento che l’associazione della PKC alle membrane è il prerequisito essenziale per la risposta fisiologica dell’enzima, particolare interesse è stato rivolto allo studio dell’effetto delle poliamine sul processo di associazione della PKC alle membrane. A questo scopo abbiamo utilizzato un sistema sperimentale costituito da PKC parzialmente purificata da cervello di ratto e da liposomi, costituiti da fosfolipidi acidi, soprattutto acido fosfatidico (PA) e fosfatidilserina (PS). La PKC associata all membrane è stata saggiata quantitativamente come recettore degli esteri del forbolo cioè misurando il legame dell’enzima attivato ad un estere del forbolo radioattivo (3H-PDBu) con cui l’enzima interagisce con una stechiometria di 1:1. Esperimenti eseguiti con liposomi di composizione definita hanno permesso di stabilire che nelle condizioni in cui prevale la formazione del complesso caratterizzato da una stechiometria di legame di 3/4 molecole di PL acido/molecola di SPM si ha un’inibizione nella formazione del complesso attivo. In questo caso infatti sembra che la SPM si disponga parallelamente alla superficie del liposoma impedendo l’ulteriore legame dell’enzima. Al contrario, nelle condizioni in cui prevale la formazione del complesso caratterizzato da una molecola di SPM/molecola di PS, la poliamina sembra legarsi perpendicolarmente alla superficie delle vescicole, e mediante i gruppi amminici non coinvolti nell’interazione con i fosfolipidi legare i siti anionici dell’enzima, favorendo l’interazione della PKC con i liposomi.