Introduzione Enterococcus faecalis è un batterio responsabile di gravi infezioni nosocomiali del tratto urinario, endocarditi e sepsi, a cui segue, seppur raramente, la meningite con una mortalità del 21%. Mediante l’uso di ceppi batterici knock-out (ko), abbiamo recentemente dimostrato (1) che l’assenza di MnSOD rende il batterio più suscettibile al killing intracellulare della microglia. In questo studio, è stato valutato il ruolo della MnSOD sulla reattività della cellula microgliale all’infezione con E. faecalis, analizzando l’espressione dei recettori purinergici P2Y6 e P2Y12, l’induzione di NFkB ed il rilascio di citochine proinfiammatorie e ossido nitrico (NO). Metodi L’espressione di P2Y6 e P2Y12 in cellule microgliali BV2 incubate con i diversi ceppi batterici è stata analizzata mediante indagini citofluorimetriche. Il dosaggio di citochine (IL-1 β, TNF-α e MIP-1 α.) e di NO nei surnatanti è stato eseguito rispettivamente mediante saggio Elisa e reattivo di Griess; la determinazione di NFkB in lisati cellulari è stata effettuata mediante kit “Nuclear Extract Kit” e “TransAMtm NFkB”. Risultati I dati ottenuti mostrano un aumento di P2Y6 e una diminuzione di P2Y12 in cellule microgliali infettate con il mutante MnSOD-ko, rispetto a cellule esposte al ceppo parentale JH2-2. Nelle stesse cellule, si osserva una maggiore induzione di NFkB ed una più elevata produzione di citochine proinfiammatorie e di NO. Conclusioni Questi risultati forniscono una prima evidenza sul ruolo immunomodulatorio della MnSOD di E. faecalis nei confronti della cellula microgliale. La resistenza di E. faecalis al killing intracellulare mediato dalla microglia, osservata in precedenza (1), può essere pertanto spiegata con la ridotta attivazione della cellula microgliale in presenza di MnSOD batterica. 1) Peppoloni et al., Microbiology, 2011
RUOLO DELLA SUPEROSSIDO DISMUTASI DI Enterococcus faecalis SULLA REATTIVITA’ DELLA MICROGLIA IN VITRO / Pellegrino, MARIA TERESA; Colombari, Bruna; Manca, Lidia; Giard, Jean Christophe; Hartke, Axel; Sanguinetti, Maurizio; Posteraro, Brunella; Fadda, Giovanni; Blasi, Elisabetta; Peppoloni, Samuele. - (2011), pp. 76-76.
RUOLO DELLA SUPEROSSIDO DISMUTASI DI Enterococcus faecalis SULLA REATTIVITA’ DELLA MICROGLIA IN VITRO
PELLEGRINO, MARIA TERESA;COLOMBARI, Bruna;MANCA, LIDIA;BLASI, Elisabetta;PEPPOLONI, Samuele
2011
Abstract
Introduzione Enterococcus faecalis è un batterio responsabile di gravi infezioni nosocomiali del tratto urinario, endocarditi e sepsi, a cui segue, seppur raramente, la meningite con una mortalità del 21%. Mediante l’uso di ceppi batterici knock-out (ko), abbiamo recentemente dimostrato (1) che l’assenza di MnSOD rende il batterio più suscettibile al killing intracellulare della microglia. In questo studio, è stato valutato il ruolo della MnSOD sulla reattività della cellula microgliale all’infezione con E. faecalis, analizzando l’espressione dei recettori purinergici P2Y6 e P2Y12, l’induzione di NFkB ed il rilascio di citochine proinfiammatorie e ossido nitrico (NO). Metodi L’espressione di P2Y6 e P2Y12 in cellule microgliali BV2 incubate con i diversi ceppi batterici è stata analizzata mediante indagini citofluorimetriche. Il dosaggio di citochine (IL-1 β, TNF-α e MIP-1 α.) e di NO nei surnatanti è stato eseguito rispettivamente mediante saggio Elisa e reattivo di Griess; la determinazione di NFkB in lisati cellulari è stata effettuata mediante kit “Nuclear Extract Kit” e “TransAMtm NFkB”. Risultati I dati ottenuti mostrano un aumento di P2Y6 e una diminuzione di P2Y12 in cellule microgliali infettate con il mutante MnSOD-ko, rispetto a cellule esposte al ceppo parentale JH2-2. Nelle stesse cellule, si osserva una maggiore induzione di NFkB ed una più elevata produzione di citochine proinfiammatorie e di NO. Conclusioni Questi risultati forniscono una prima evidenza sul ruolo immunomodulatorio della MnSOD di E. faecalis nei confronti della cellula microgliale. La resistenza di E. faecalis al killing intracellulare mediato dalla microglia, osservata in precedenza (1), può essere pertanto spiegata con la ridotta attivazione della cellula microgliale in presenza di MnSOD batterica. 1) Peppoloni et al., Microbiology, 2011Pubblicazioni consigliate
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